УФ-детектор DWD-1 (високопродуктивний подвійний промінь подвійної хвильової довжини) з вбудованою обробкою даних

Діапазон довжин хвиль: 254 нм, 280 нм (одночасне виявлення), а також вибрати дві довжини хвиль між 254 нм, 280 нм-400 нм спектральних ліній.

Особливості інструменту DWD-1

Вимірювання двох довжин хвиль білка 280nm/254nm:

Білкові молекули містять двозв'язані ароматичні амінокислоти, такі як тирозин і трин. Вони мають властивості поглинання ультрафіолетового світла, його пік поглинання на довжині хвилі 280 нм, і в цій довжині хвилі значення щільності поглинання піка є позитивно пропорційним до його концентрації, тому може бути в якості білка, кількісне визначення основи, саме тому, метод ультрафіолетової поглинання на довжині хвилі 280 нм зазвичай використовується для безперервного моніторингу концентрації білка в системі паралізу. Але оскільки різні білки містять різні вмісти тирозіну та триніну, для точного визначення кількості необхідно мати чистий білок, який має бути вимірений, як стандарт для порівняння, або вже знає його коефіцієнт фотознищення як посилання. Крім того, багато не білкових речовин також мають визначену поглинаючу здатність при довжині хвилі 280 нм, що може викликати перешкоди. Особливо сильніше впливають на нуклеїнові кислоти (пурини та пиримидини). Поглинання на 280 нм в 10 разів сильніше, ніж білок (на грам), але нуклеїнова кислота поглинається сильніше на 254 нм, з піком поглинання близько 254 нм. Нуклеїнова кислота при 254 нм в два рази більше, ніж при 280 нм.

У білку, навпаки, 280 нм ультрафіолетове поглинання більше, ніж 254 нм.

Зазвичай：

Співвідношення поглинання світла в чистому білку: A280/A254" 1,8

Відношення поглинання світла чистої нуклеїнової кислоти: A280/A254

Тому при одночасній присутності нуклеїнової кислоти в розчині білка (як це відбувається в більшості біологічних систем), необхідно визначити одночасно OD254 нм і OD280 нм. Потім на основі співвідношення поглинання двох довжин хвиль реальний вміст білка розраховується за допомогою емпіричних формул, щоб усунути вплив нуклеїнової кислоти.

Концентрація білка = 1,45 × A280 – 0,74 × A254 (мг/мл)

Ця експериментальна формула була встановлена за допомогою даних, визначених рядом сумішей білків (дрожжів енололази) і нуклеїнових кислот (дрожжів нуклеїнових кислот) у відомих різних співвідношеннях концентрацій.